KM-12-SM傳代復蘇細胞株哪提供 "

從基礎的地方教起，一步一步詳細介紹細胞培養技術，非常好的開門教程
常用設備
準備室的設備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、
高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品柜（放置消毒過的物品）、包裝臺。
配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。
培養室的設備：液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱（-80℃）、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。
放在無菌間的設備：離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱（放置serum和培養用液）。
無菌操作
無菌室的滅菌：
定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅擦拭。
CO2孵箱（培養箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭，再用紫外燈照射
實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各20-30分鐘
實驗后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
實驗人員的無菌準備：
肥皂洗手。
穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
用75％酒精棉球擦凈雙手。" "

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公司已合作單位有山西中醫學院、福建醫科大學附屬第二醫院、上海市第六人民醫院、北京大學醫學部、四平中心醫院、廣州中醫藥大學、中科院上海生命科學研究院生化與細胞研究所、解放軍第306醫院、江南大學、西南醫院、吉首大學、西南大學化學化工學院、寧波大學、福建醫科大學附屬醫院、中南大學、延安大學附屬醫院、中國科學院上海藥物研究所、天津市兒童醫院、江蘇省中醫藥研究院、湘雅醫學院、第四軍醫大學預防系勞動與環境教研室、揚州大學、上海交通大學、中國醫科大學、浙江省立同德醫院、中國人民解放軍第150中心醫院、蘇州大學、四川大學華西醫院、云南大學、揚州大學獸醫學院、上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院、海南醫學院、江蘇腫瘤醫院、上海市閔行區中心醫院、大連醫科大學附屬醫院、中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院、沈陽藥科大學、廣州市第八人民醫院、南京大學、浙江中醫藥大學、蘭州大學、上海中醫藥大學、中國農業科學院飼料研究所、廈門市婦幼保健院、重慶大學、南京軍區總醫院、天津市人民醫院、北京醫學科學腫瘤醫院、江蘇大學、桂林醫學院附屬醫院、中國科學院化學研究所、、鄭州大學附屬醫院、湖北省人民醫院、四川大學華西第二醫院、廣州中醫藥大學附屬醫院、黑龍江中醫藥大學附屬醫院、青海紅十字醫院、廣州醫學院附屬醫院、北京紅十字朝陽醫院、中國醫科大學附屬一院、江西中醫學院附屬醫院、北京中醫藥大學東直門醫院、山西醫科大學附屬醫院、上海長海醫院、北京阜外醫院、北京安貞醫院、上海遠大心胸醫院、哈爾濱醫科大學臨床醫學院、廣東霍英東心臟中心、中山醫科大學中山眼科中心、天津眼科醫院、溫州醫學院附屬眼視光醫院、北京兒童醫院、重慶醫科大學附屬兒童醫院、復旦大學附屬兒童醫院、南京中醫藥大學附屬第二醫院、湖北十堰市太和醫院、濟南市兒童醫院、中南大學湘雅二醫院、天津醫科大學代謝病醫院" "

細胞培養集錦(一個培養300多種細胞人的經驗總結)
一、消化與吹打
很多朋友討論細胞培養問題，見到很多很好的經驗總結，這里說一些我個人的經驗，因為一些比較特殊的原因，我自己培養接觸過近300種細胞，常用于做實驗的，累積有百余種，可以說遇到過許多各式各樣古怪的細胞。這里挑細胞消化開始做我的篇專題，并不是因為細胞消化重要，而是近期看到大家頻繁討論這個話題，我就拋磚引玉，下面幾點拙見，可能與其它朋友總結的一些經驗有點出入，僅供大家參考。
許多同學對細胞消化做了許多研究，得出了很多有價值的經驗，也見到很多人的困惑。其實細胞培養，尤其是細胞系的培養，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結經驗，就能把細胞越養越好。一般的程序步驟，細節操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如果不對之處，歡迎指正，一起討論：
1)其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。
2)什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養就是一個一個分開）。細胞只要能從基質上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者像有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現。
3)我常看到一個比較復雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是次聽說，應該是網友自己發展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養過的近300株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養好，這個視細胞而定。如果和標準形態不一致，那可能是自己沒消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好。
4)比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。
5)常規的細胞實驗（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數實驗，比如病毒包裝，對細胞代數，對細胞狀態要求。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數一多，細胞包裝能力就會逐漸下降（當然也有其它因素影響包裝效率）。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白。
6)EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不的話），而應該想其它辦法。
7)PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
總結下來，雖然以上說的是關于消化的，但其實消化并不是細胞培養的關鍵所在（雖然很重要），關鍵所在是細胞來源，血清質量和水源（自己配制溶液的話）。我看到版上許多人養細胞遇到各種各樣的問題，很多時候bottleneck沒有找到，雖然通過其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因為人們往往注意自己的操作，總覺得自己沒有經驗，而忽視試劑，溶液尤其是細胞的質量，后者其實才是許多細胞培養實驗室常見的問題。" "

無菌操作的演示：
凡是帶入超凈工作臺內的酒精、PBS、培養基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
靠近酒精燈火焰操作。
器皿使用前過火滅菌
繼續使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。 各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
自來水刷洗，除去灰塵。
烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。
刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。
泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗15次，后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。 高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向15磅時，維持20-30分鐘。
高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過來蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液），12小時后從酸缸內撈出器皿立即用自來水沖洗（避免蛋白質干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次。
烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝。" "

公司提供部分ATCC細胞有(限于頁面篇幅，公司全部細胞并未展示，如有具體所需細胞，請咨詢我們哦┈技┈術(訂購)┈熱┈線：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈號)┈聯┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CRL-1459|CCD-18Co細胞；CRL-2797|MOVAS細胞；CRL-1831|FHC細胞；CRL-2638|CT26.WT [CT26WT]細胞；HB-8064|Hep 3B2.1-7細胞；CCL-2.1|Hela 229細胞；HB-8065|Hep G2細胞；CCL-131|Neuro-2a/N2a細胞；CRL-2780|ATRFLOX[Mutatect]細胞；CL-188|LS174T細胞；CRL-2547|Panc 10.05細胞；HB-8065|HepG-2細胞；CCL-13|HeLa[Chang Liver]細胞；CRL-2233|SNU-398細胞；CCL-75.1|WI－38AV13細胞；CRL-5892|NCI-H1755[H1755]細胞；CRL5844|NCI-H838[H838]細胞；CRL-5875|NCI-H1563[H1563]細胞；CRL-5928|NCI-H2170[H2170]細胞；CRL-2177|SW 1271[SW-1271; SW1271]細胞；CRL-5889|NCI-H1703[H1703]細胞；CRL-5826|NCI-H226[H226]細胞；CRL-5900|NCI-H1869[H1869]細胞；HTB-59|SW 900[SW-900; SW900]細胞；CRL-1573|HEK-293細胞；CRL-1441|G401細胞；CRL-1500|ZR75-1細胞；CRL-1504|ZR75-30細胞；HTB-126|Hs-578T細胞；CRL-1897|UACC812細胞；HTB-111|AN3 CA細胞；CCL-2.1|HeLa229細胞；CRL-7924|HeLa-S3細胞；HTB-81|DU-145細胞；CRL-11610|RWPE2細胞；CRL-7002|Hs 1.Tes細胞；CRL-7131|Hs 181.Tes細胞；CRL-1740|LNCaP clone FGC細胞；" "

C1606 Hs 888.T復蘇形式細胞株
C1605 Hs 870.T復蘇形式細胞株
C1604 Hs 863.T復蘇形式細胞株
C1603 Hs 852.T復蘇形式細胞株
C1602 Hs 840.T復蘇形式細胞株
C1601 Hs 839.T復蘇形式細胞株
C1600 Hs 822.T復蘇形式細胞株
C1599 Hs 821.T復蘇形式細胞株
C1598 Hs 819.T復蘇形式細胞株
C0594 Hs 793.Sk復蘇形式細胞株
C1597 Hs 766T復蘇形式細胞株
C1596 Hs 742.T復蘇形式細胞株
C1595 Hs 739.T復蘇形式細胞株
C1594 Hs 737.T復蘇形式細胞株
C1593 Hs 729復蘇形式細胞株
C1592 Hs 706.T復蘇形式細胞株
C1591 Hs 695T復蘇形式細胞株
C4734 Hs 683復蘇形式細胞株
C1588 Hs 675.T復蘇形式細胞株
C1587 Hs 611.T復蘇形式細胞株
C1586 Hs 606.T復蘇形式細胞株
C1585 Hs 604.T復蘇形式細胞株
C1584 Hs 600.T復蘇形式細胞株
C0593 Hs 578T復蘇形式細胞株
C4445 Hs 578Bst復蘇形式細胞株
C1583 Hs 343.T復蘇形式細胞株
C1582 Hs 294T復蘇形式細胞株
C1581 Hs 281.T復蘇形式細胞株
C1580 Hs 274.T復蘇形式細胞株
C4451 Hs 181.Tes復蘇形式細胞株
C4450 Hs 1.Tes復蘇形式細胞株
C0591 HRT-S1復蘇形式細胞株
C0590 HRPEpiC復蘇形式細胞株
C0589 hRMECs復蘇形式細胞株
C0588 HRMC復蘇形式細胞株
C0587 HRGEC復蘇形式細胞株
C0586 HREpiC復蘇形式細胞株
C0585 HRCEpiC復蘇形式細胞株
C0584 HRC-99復蘇形式細胞株
C7007 HRA-19復蘇形式細胞株
C0583 HR-8348復蘇形式細胞株
C0582 HPT-8復蘇形式細胞株
C0581 HPNC復蘇形式細胞株"