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從基礎的地方教起，一步一步詳細介紹細胞培養(yǎng)技術，非常好的開門教程
常用設備
準備室的設備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、
高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品柜（放置消毒過的物品）、包裝臺。
配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。
培養(yǎng)室的設備：液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。
放在無菌間的設備：離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。
無菌操作
無菌室的滅菌：
定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅擦拭。
CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭，再用紫外燈照射
實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
實驗后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
實驗人員的無菌準備：
肥皂洗手。
穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
用75％酒精棉球擦凈雙手。" "

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公司已合作單位有山西中醫(yī)學院、福建醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院、北京大學醫(yī)學部、四平中心醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學、中科院上海生命科學研究院生化與細胞研究所、解放軍第306醫(yī)院、江南大學、西南醫(yī)院、吉首大學、西南大學化學化工學院、寧波大學、福建醫(yī)科大學附屬醫(yī)院、中南大學、延安大學附屬醫(yī)院、中國科學院上海藥物研究所、天津市兒童醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)藥研究院、湘雅醫(yī)學院、第四軍醫(yī)大學預防系勞動與環(huán)境教研室、揚州大學、上海交通大學、中國醫(yī)科大學、浙江省立同德醫(yī)院、中國人民解放軍第150中心醫(yī)院、蘇州大學、四川大學華西醫(yī)院、云南大學、揚州大學獸醫(yī)學院、上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院、海南醫(yī)學院、江蘇腫瘤醫(yī)院、上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院、大連醫(yī)科大學附屬醫(yī)院、中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、沈陽藥科大學、廣州市第八人民醫(yī)院、南京大學、浙江中醫(yī)藥大學、蘭州大學、上海中醫(yī)藥大學、中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所、廈門市婦幼保健院、重慶大學、南京軍區(qū)總醫(yī)院、天津市人民醫(yī)院、北京醫(yī)學科學腫瘤醫(yī)院、江蘇大學、桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院、中國科學院化學研究所、、鄭州大學附屬醫(yī)院、湖北省人民醫(yī)院、四川大學華西第二醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院、黑龍江中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院、青海紅十字醫(yī)院、廣州醫(yī)學院附屬醫(yī)院、北京紅十字朝陽醫(yī)院、中國醫(yī)科大學附屬一院、江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院、北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院、山西醫(yī)科大學附屬醫(yī)院、上海長海醫(yī)院、北京阜外醫(yī)院、北京安貞醫(yī)院、上海遠大心胸醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學臨床醫(yī)學院、廣東霍英東心臟中心、中山醫(yī)科大學中山眼科中心、天津眼科醫(yī)院、溫州醫(yī)學院附屬眼視光醫(yī)院、北京兒童醫(yī)院、重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院、復旦大學附屬兒童醫(yī)院、南京中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院、湖北十堰市太和醫(yī)院、濟南市兒童醫(yī)院、中南大學湘雅二醫(yī)院、天津醫(yī)科大學代謝病醫(yī)院" "

細胞培養(yǎng)集錦(一個培養(yǎng)300多種細胞人的經(jīng)驗總結)
一、消化與吹打
很多朋友討論細胞培養(yǎng)問題，見到很多很好的經(jīng)驗總結，這里說一些我個人的經(jīng)驗，因為一些比較特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過近300種細胞，常用于做實驗的，累積有百余種，可以說遇到過許多各式各樣古怪的細胞。這里挑細胞消化開始做我的篇專題，并不是因為細胞消化重要，而是近期看到大家頻繁討論這個話題，我就拋磚引玉，下面幾點拙見，可能與其它朋友總結的一些經(jīng)驗有點出入，僅供大家參考。
許多同學對細胞消化做了許多研究，得出了很多有價值的經(jīng)驗，也見到很多人的困惑。其實細胞培養(yǎng)，尤其是細胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結經(jīng)驗，就能把細胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如果不對之處，歡迎指正，一起討論：
1)其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續(xù)這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。
2)什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細胞已經(jīng)立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開）。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者像有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現(xiàn)。
3)我常看到一個比較復雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是次聽說，應該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數(shù)非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個視細胞而定。如果和標準形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好。
4)比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。
5)常規(guī)的細胞實驗（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降（當然也有其它因素影響包裝效率）。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。
6)EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不的話），而應該想其它辦法。
7)PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
總結下來，雖然以上說的是關于消化的，但其實消化并不是細胞培養(yǎng)的關鍵所在（雖然很重要），關鍵所在是細胞來源，血清質(zhì)量和水源（自己配制溶液的話）。我看到版上許多人養(yǎng)細胞遇到各種各樣的問題，很多時候bottleneck沒有找到，雖然通過其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因為人們往往注意自己的操作，總覺得自己沒有經(jīng)驗，而忽視試劑，溶液尤其是細胞的質(zhì)量，后者其實才是許多細胞培養(yǎng)實驗室常見的問題。" "

無菌操作的演示：
凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
靠近酒精燈火焰操作。
器皿使用前過火滅菌
繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。 各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
自來水刷洗，除去灰塵。
烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。
刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。
泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。 高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向15磅時，維持20-30分鐘。
高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過來蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液），12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗（避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次。
烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝。" "

公司提供部分ATCC細胞有(限于頁面篇幅，公司全部細胞并未展示，如有具體所需細胞，請咨詢我們哦┈技┈術(訂購)┈熱┈線：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈號)┈聯(lián)┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CRL-1459|CCD-18Co細胞；CRL-2797|MOVAS細胞；CRL-1831|FHC細胞；CRL-2638|CT26.WT [CT26WT]細胞；HB-8064|Hep 3B2.1-7細胞；CCL-2.1|Hela 229細胞；HB-8065|Hep G2細胞；CCL-131|Neuro-2a/N2a細胞；CRL-2780|ATRFLOX[Mutatect]細胞；CL-188|LS174T細胞；CRL-2547|Panc 10.05細胞；HB-8065|HepG-2細胞；CCL-13|HeLa[Chang Liver]細胞；CRL-2233|SNU-398細胞；CCL-75.1|WI－38AV13細胞；CRL-5892|NCI-H1755[H1755]細胞；CRL5844|NCI-H838[H838]細胞；CRL-5875|NCI-H1563[H1563]細胞；CRL-5928|NCI-H2170[H2170]細胞；CRL-2177|SW 1271[SW-1271; SW1271]細胞；CRL-5889|NCI-H1703[H1703]細胞；CRL-5826|NCI-H226[H226]細胞；CRL-5900|NCI-H1869[H1869]細胞；HTB-59|SW 900[SW-900; SW900]細胞；CRL-1573|HEK-293細胞；CRL-1441|G401細胞；CRL-1500|ZR75-1細胞；CRL-1504|ZR75-30細胞；HTB-126|Hs-578T細胞；CRL-1897|UACC812細胞；HTB-111|AN3 CA細胞；CCL-2.1|HeLa229細胞；CRL-7924|HeLa-S3細胞；HTB-81|DU-145細胞；CRL-11610|RWPE2細胞；CRL-7002|Hs 1.Tes細胞；CRL-7131|Hs 181.Tes細胞；CRL-1740|LNCaP clone FGC細胞；" "

C1616 HT-144傳代復蘇細胞株
C0621 HT-1376傳代復蘇細胞株
C1615 HT-1197傳代復蘇細胞株
C0620 HT-1080傳代復蘇細胞株
C4724 HT1080傳代復蘇細胞株
C1614 HT傳代復蘇細胞株
C6057 HSPC-1傳代復蘇細胞株
C0619 HSkMC傳代復蘇細胞株
C0618 HSF傳代復蘇細胞株
C0617 HSC-T6傳代復蘇細胞株
C1613 HSC-4傳代復蘇細胞株
C1612 HSC-3傳代復蘇細胞株
C1611 HSC-2傳代復蘇細胞株
C0616 HSC1傳代復蘇細胞株
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C0614 HSAS4傳代復蘇細胞株
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C0610 Hs917.T傳代復蘇細胞株
C4229 Hs888Lu傳代復蘇細胞株
C1610 Hs865.Sk傳代復蘇細胞株
C0608 HS776T傳代復蘇細胞株
C4104 HS-746T傳代復蘇細胞株
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C0606 Hs683傳代復蘇細胞株
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C0602 Hs578Bst傳代復蘇細胞株
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C0600 HS505.T傳代復蘇細胞株
C7074 HS445傳代復蘇細胞株
C0599 HS-4傳代復蘇細胞株
C0598 Hs27傳代復蘇細胞株
C0597 Hs181.Tes傳代復蘇細胞株
C0596 Hs1.Tes傳代復蘇細胞株
C0595 HS-1傳代復蘇細胞株
C1609 Hs 940.T傳代復蘇細胞株
C1608 Hs 934.T傳代復蘇細胞株
C1607 Hs 895.T傳代復蘇細胞株"